Заключение об эффективности разрабатываемых средств защиты от токсинов.

МИНИСТЕРСТВО ОБОРОНЫ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
   НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ

НАЧАЛЬНИК НИИМ МО РФ
АКАДЕМИК МАИ
Е. ПИМЕНОВ
28 ноября 1997г.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ОБ ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗРАБАТЫВАЕМЫХ
СРЕДСТВ ЗАЩИТЫ ОТ ТОКСИНОВ

(Научно-техническая продукция по теме «Разработка методов обнаружения токсинов в пищевых продуктах и средств защиты от их воздействия «шифр «Эдельвейс – 1», Госконтракт № 14Д-96/545 от 03.01.96г., этап 2).

Научный руководитель работы:
Начальник отдела токсинологии Б. Рудой
28 ноября 1997г.

г. Киров, 1997г.

В соответствии с календарным планом НИР по теме «Разработка методов обнаружения токсинов в пищевых продуктах и средств защиты от их воздействия» на базе отдела токсинологии НИИМ МО РФ были проведены испытания эффективности использования препарата «Рекицен-РД» при попадании в организм ботулинического токсина типа А энтеральным путем.

 В работе использованы следующие материалы и методы:

• препарат «Рекицен-РД», приготовленный в соответствии с ТУ 929500-05344371-001-96 методом твердофазного культивирования на растительном субстрате специального отселекционированного штамма Saccharоmyсes cervisille (vini) № ВКПМ У – 511; 1,0г. сухого продукта содержит 1,0х1010 – 1,2х1010 клеток; остаточная влажность препарата (5,0±1,0)%
  
• глицериновый препарат ботулинического токсина типа А с концентрацией 1х108 УЕ/мл (1УЕ соответствует 1LD50 токсина при внутрибрюшинном введении белым мышам)
  
• беспородные белые мыши обоего пола, массой 18…22г.
  
• весы лабораторные типа ВЛТК – 200
  
• фотоэлектрокалориметр типа ФЭК – 56
  
• термостат электрический типа ЭУ – 1125
  
• центрифуга лабораторная типа Т – 23
  
• шприцы туберкулиновые
  
• краситель метиленовый синий
  
• тальк медицинский

Показатель LD50 рассчитывали по формуле Кербера - Ашмарина.
Показатель ST50 рассчитывали по формуле:

             t1n1+t2n2+tnnn
ST50 = ————————
                      N

где ST50 – среднее время до гибели
n – число павших животных за время t
N – общее количество животных, взятых в опыт.

На первом этапе проводилась оценка сорбционной емкости «Рекицена-РД». Исследования выполнены в соответствии с ГОСТ 4453-74 «Уголь активированный осветляющий древесный порошкообразный» с использованием красителя метиленового синего. Сорбционная емкость составила 4,2мг красителя на 1,0г препарата.

На следующем этапе проведен анализ токсинсвязывающей активности «Рекицена-РД» in vitro. С этой целью навеску 1,0г препарата вносили в емкость, содержащую 10мл ботулинического токсина типа А, разведенного до концентрации (1000:х1,4) УЕ в 1мл. Смесь тщательно перемешивали и выдерживали при температуре 37 С в течение 45 минут. После чего проводили центрифугирование при 4000 об/мин в течение 20 минут. Надосадочную жидкость отбирали с целью определения в ней концентрации ботулотоксина при внутрибрюшинном введении белым мышам.

В качестве контроля использован полученный аналогичным образом препарат токсина, в который вместо «Рекицена-РД» добавлялся 1,0г талька. Результаты анализа представлены в табл.1.

Таблица 1
Исследование токсинсвязывающей способности «Рекицена-РД» в опытах in vitro.

На заключительном этапе проведен анализ токсиннейтрализующего действия «Рекицена-РД» в опытах in vivo на белых мышах при пероральном способе введения препаратов. Для этого белых мышей предварительно в течение 24 часов не кормили, после чего перорально вводили препарат ботулинического токсина типа А и сразу давали корм. Опытная группа животных получала смесь равных частей зерна и «Рекицена-РД», контрольная группа – только зерно.

Потребленная доза «Рекицена-РД» определялась по остатку корма через каждые 24 часа и составляла примерно 1,5…2,0 грамма в сутки на 1 мышь. За животными наблюдали в течение 4 суток, из которых первые двое суток – каждые 4 часа. По результатам гибели животных определялась величина LD50 токсина для опытной и контрольной групп, а также показатель ST50 (среднее время до гибели). Результаты данных исследований обобщены в табл.2.

Таблица 2
Оценка токсиннейтрализующей способности «Рекицена-РД» в опытах in vivo.

Примечания:

1. Числитель – количество павших животных, знаменатель – число животных, взятых в опыт.
   
2. Приведены значения средней арифметической времени гибели животных с достоверностью 95%.
   
3. Показатель рассчитан по методу Кербера-Ашмарина.

Таким образом, по результатам работы можно сделать следующие выводы:

1. «Рекицен-РД» обладает сорбционной активностью в отношении ботулинического токсина типа А.
   
2. «Рекицен-РД», потребляемый непосредственно после введения ботулотоксина через рот способен частично связывать и нейтрализовать его с эффективностью примерно 3000…5000 УЕ на 1,0г. препарата и увеличивать среднее время до гибели животных на 11…15 часов.

Предложения:
Для получения уточненных результатов энтеросорбционной активности «Рекицена-РД» in vivo целесообразно проведение исследований на крупных экспериментальных животных с введением им через рот заданных количеств данного препарата.

Кроме того, представляется целесообразным провести изучение нейтрализующей способности «Рекицена-РД» по отношению к другим токсинам, например, шигеллезному, стафилококковому и др.

Старший научный сотрудник отдела токсинологии А. Юрченко

Научный сотрудник отдела токсинологии А. Федотов

Подробная информация на сайте www.rekicen.ru